دانشگاه گیلان تحقیقات تولیدات دامی 2252-0872 4 4 2016 02 20 Identification of available mutations in the first-half (from 5’ end) of exon 2 of GDF9 gene in crossbred sheep from crossing of Romanov and Lori-Bakhtiari breeds شناسایی جهش های موجود در نیمه اول (منتهی به5') اگزون 2 ژن GDF9 گوسفندان آمیخته حاصل از تلاقی نژادهای رومانوف و لری بختیاری 15 26 1635 FA رسول خدابخش زاده دانشجوی کارشناسی ارشد ژنتیک و اصلاح نژاد دام، گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهید باهنر کرمان محمدرضا محمدآبادی دانشیار گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهید باهنر کرمان حسین مرادی شهربابک استادیار گروه علوم دامی دانشکده مهندسی علوم دامی و زراعی، پردیس کشاورزی و منابع طبیعی کرج، دانشگاه تهران علی اسمعیلی زاده کشکوئیه دانشیار گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهید باهنر کرمان Journal Article 2016 03 29 For decreasing the number of breeding ewes on pastures and prevention of demolition pastures, it seems that animal breeding programs are benefit for identifying effective candidate genes on litter size in Iranian sheep breeds and using those. The TGFβ family genes are one of the most important effective factors on litter size in sheep. The GDF9 gene is one of the most important members from this family.  The aim of the present study was to identify available mutations in exon 2 of GDF9 gene in crossbred sheep (Romanov rams × Lori-Bakhtiari ewes) using PCR-SSCP. In this study, after extraction genomic DNA from blood samples of 36 crossbred animals with 3-6 months old (17 males and 19 females), the first region (from 5’ end) of exon 2 (634bp segments) of GDF9 gene was amplified using PCR. The single stranded conformation polymorphism (SSCP) patterns of PCR products were studied using acrylamide gel electrophoresis and silver staining method and then from any pattern one sample sequenced. In the studied population, 3 banding patterns 1, 2, and 3 obtained with frequencies of 0.305, 0.584 and 0.111, respectively. The sequencing results showed presence of 4 mutations (471, 477, 520 and 721 situations) in the studied population. برای کاهش تعداد میش­های مولد روی مراتع و جلوگیری از تخریب مراتع به نظر می­رسد که برنامه‏های اصلاح­نژادی جهت شناسایی ژن­های کاندیدای موثر بر صفت چندقلوزایی در نژادهای بومی کشور و استفاده از آنها مفید هستند. از جمله مهم­ترین عوامل مؤثر بر چندقلوزایی گوسفندان ژن­های خانواده  TGFβهستند. ژن فاکتور رشد و تمایز شماره 9(GDF9)   از اعضای مهم این خانواده است. هدف از انجام این تحقیق شناسایی چندشکلی­های تک­نوکلئوتیدی موجود در نیمه اول (منتهی به  5َ رشته پیشرو) اگزون 2 ژنGDF9  در گوسفندان آمیخته حاصل از تلاقی بین قوچ­های نژاد رومانوف با میش­های نژاد لری­بختیاری به روش PCR-SSCP بود. در تحقیق حاضر پس از استخراج DNA به روش نمکی از 36 نمونه خون گوسفندان آمیخته نر و ماده 6-3 ماهه (17 نر و 19 ماده)، از واکنش زنجیرهای پلیمراز برای تکثیر قطعه 634 جفت بازی DNA استفاده شد. سپس بررسی چندشکلی فرم فضایی رشته­های منفرد (SSCP) محصولات PCR به وسیله ژل پلی­اکریل­آمید 8 درصد و رنگ­آمیزی نیترات نقره انجام و سپس از هر الگو یک نمونه تعیین توالی شد. در نمونه­­های مورد مطالعه، سه الگوی باندی 1، 2 و 3 به ترتیب با فراوانی 305/0، 584/0 و 111/0 برای قطعه تکثیر شده به­دست آمد. همچنین نتایج توالی­یابی منجر به شناسایی چهار جهش در موقعیت­های نوکلئوتیدی 471، 477، 520 و 721 ژن GDF9 در جمعیت مورد مطالعه شد. https://ar.guilan.ac.ir/article_1635_ad3cbe03998264c7ff6a2779108be9d3.pdf